奥希替尼在ex20ins环境中的潜力，这项研究仅限于使用体外ba/f3工程细胞模型，因此我们采用了一个更全面的方法来评估奥希替尼，通过更多的临床相关模型和体内附加研究。ex20ins的一个关键挑战是突变场景的多样性，有超过100个可能的突变被确定，所以不可能描述所有可能的ex20ins变异。因此，我们的主要策略是将奥希替尼的评价集中在两种最常见的ex20ins(d770n771inssvd和v769d770insasv)上，这两种类型的ex20ins约占这类患者的40%。
我们的发现提供证据表明，两个最普遍的临床变异ex20ins突变，svd(d770_n771inssvd)和ex20insasv(v769_d770insasv)，在一种类似于正则激活突变的方式中，本质上是活跃的。重要的是，我们报道了奥希替尼和az5104(奥希替尼的一种循环代谢物)的临床前活性，针对这两种最常见的临床上ex20ins突变变体。尽管egfrex20蛋白具有突变异质性，但我们认为能有效地针对这些普遍突变的tkis可能至少为这个egfr突变子集提供显着的临床益处。
此外，我们利用工程化的临床前模型和病人来源的异种移植物(pdxs)，证明了针对各种不太流行的ex20ins突变的活性，表明针对多种变异形式的潜力更大。鉴于缺乏可用的内源性细胞系模型，我们利用crispr编辑技术将表达野生型egfr的nci-h2073细胞转化为细胞系，同质地表达两种最流行的ex20ins突变体。
使用这种方法，我们能够首次证明，在疾病相关的细胞背景下，这些普遍的突变足以授予非小细胞肺癌细胞依赖配体无关的egfr信号，伴随着更常见的特征性egfr突变，如结构性受体磷酸化和受体内涵体内化。综上所述，这些研究支持这样的观点，即ex20ins突变具有许多与常见的激活突变相似的信号和细胞生物学特征，尽管它们的突变变化各不相同。但是，还需要进一步的探索性研究，以更好地了解与ex20ins生物学相关的分子机制，并与其他激活突变相比较。利用体外磷酸化-表皮生长因子受体研究、奥希替尼及其活性代谢产物az5104有效地抑制了表皮生长因子受体的ex20ins突变型，其抑制能力可与之前发表的普通激活突变型和t790m突变型相媲美。
与野生型egfr相比，奥希替尼对常见的活化突变体和t790m突变体具有选择性活性。虽然ex20ins突变体缺乏与atp结合位点近似的t790m相关的结构差异，但奥希替尼突变体的选择性特征与其他的tkis突变体相比，仍然保持ex20ins突变体的特征。Tkis的野生型egfr活性被认为是限制临床接触突变型egfr目标的关键因素，因此可能影响临床效益。因此值得注意的是，虽然afatinib同样显示了高水平的磷酸化-表皮生长因子受体效力跨ex20ins变异体体外，也同样显示了更高水平的抗wt-egfr相比奥希替尼的效力。
随后的体外增殖研究进一步证实了野生型边缘的结果。有趣的是，pegfr分析中观察到的ex20ins突变体与wtegfr之间的选择性差异，在慢性增殖分析中对奥希替尼并不明显，其原因仍不清楚，尽管可能是由于细胞系间信号阈值的差异。尽管如此，值得注意的是afatinib和gefitinib在wtegfr和fqea变异体之间有着非常相似的效力，这已被临床证明对这些tkis很敏感。另一方面，与其他流行的ex20ins变异相比，tkis基因的增殖活性明显低于wtegfr。
这些数据提供了一个有用的基准，并进一步支持这样的概念，即突变egfr和wtegfr之间的活性平衡对于推动临床效益是重要的，也就是说，只有在fqea中，wtegfr药理学不是主要的限制活性。在这方面，虽然其他tkis表现出明显下降的效力从wtegfr到流行的ex20ins形式，表明wtegfr活性可能更多的剂量限制，奥希替尼保留了一个更具可比性的效力平衡之间的wtegfr和所有ex20ins突变。总的来说，体外数据支持这样一个前提，即与非选择性抑制野生型egfr相关的剂量限制毒性可能对限制afatinib跨ex20ins变体的有效性产生更大的影响，相对于奥希替尼，尽管在结构上仍不清楚mertinib如何保持对osiex20ins变体中野生型更有利的选择性。
为了研究奥希替尼及其代谢产物的效能如何转化为体内效能，将改良的h2073模型作为异种移植物建立。在体内，奥希替尼以每天25毫克/千克的剂量在两个ex20ins模型中都表现出高水平的抗肿瘤活性，这个剂量与临床批准的靶向t790m肿瘤的80毫克剂量大致一致。此外，取得的疗效水平明显高于临床相关剂量的阿法替尼。与体外药理学一致az5104代谢物同样能够达到高水平的肿瘤抑制。奥希替尼和az5104的肿瘤抑制活性与针对egfr靶点和下游信号通路的强力机制活性相关，尽管通路抑制的短暂性可能意味着需要更持久的抑制才能在这些模型中实现强有力的肿瘤收缩。
最后，为了评估更直接模拟临床环境的ex20ins模型的活性，我们在三个独立的pdx模型中测试了这些tkis。最值得注意的是，我们证明奥希替尼的肿瘤抑制活性优于erlotinib和afatinib，在一个pdx包含最常见的egfr外显子20个插入(v769d770insasv)，符合h2073模型包含相同的插入变异。此外，在另外两个含有较少流行ex20in的pdx模型中，奥希替尼与afatinib相比同样具有较高的抗肿瘤活性(m766a767insasv;h773v774insnph)。这些数据首次表明，奥希替尼在ex20ins环境中的潜力，奥希替尼可以在不同的ex20inspdx模型在临床相关剂量在体内实现优于afatinib的生长抑制。然而，值得注意的是，尽管肿瘤生长抑制水平令人鼓舞，最大耐受前临床剂量25mg/kg的奥希替尼不能达到在体内模型中观察到的相同水平的萎缩，这些模型代表了典型的egfr激活和t790m突变体。需要进一步开展工作，以便更好地了解这种较为有限的临床前疗效是否与所使用模型的固有背景、ex20蛋白的生物学差异以及/或临床前剂量和pk水平的限制有关。但是，奥希替尼对ex20ins突变体的体外效力较低，抑制肿瘤生长的能力较低，这表明临床上可能需要增加给药剂量(如160mg奥希替尼)。鉴于临床前可达到的剂量有限(即临床前研究不能重复使用160毫克的临床剂量)，临床环境中针对外源性20抗体肿瘤的最佳剂量水平问题只能在临床上凭经验探讨。
综合起来，这里提出的工作提供了一个全面的临床前体外和体内评价奥希替尼相比，其他批准的tkis在这一部分。与先前的报告一致，我们的数据支持奥希替尼具有与早期一代tkis相比的分化特征:在一系列ex20ins变异体上的高体外效力，更一致和有利的wtegfr选择性边缘的证据，在一系列临床相关剂量的异种移植物和pdx模型上的高效性。虽然额外的临床前研究是有保证的，以进一步我们的理解，ex20ins的生物学和反应，如奥希替尼跨越这个多样的突变景观，这些研究有局限性，充分预测临床利益，而且不能完全概括多重复杂性，如pk差异，代谢产物的贡献，剂量水平等，因此，我们提出，经验性临床研究将需要充分评估merb跨越不同的ex20ins突变景观，并通知最佳剂量。总的来说，我们认为这里提出的工作提供了足够的证据，以保证临床测试奥希替尼在这个egfr激活突变ex20ins人口，以确定奥希替尼是否可以提供改善的临床效益，作为一个重要的未满足需要的下一代tki。
发表于 2020-9-27 16:38:33
